番茄斑萎病毒病病毒提纯方法有哪些？

病毒粒子易降解，在提纯时需要加入还原剂（O.O1mol/L.Na2S03）。提纯病毒应在4℃条件下进行，产量约为每100g来自黄花烟草Nicotiana.rustica的病叶材料可以获得100～1000mg病毒。从系统侵染的黄花烟草采集病叶，每克叶片加入3mL提取缓冲液（0.01mol/L亚硫酸钠，0.1mol/L硫酸钠，pH7.0）研磨。研磨可以在匀浆机中进行，采用中速，点动5～10次。匀浆的组织用纱布过滤，然后在10OOOr/min下离心15min。取沉淀物并溶于用量为每克叶片组织加入1mL的缓冲液中（0.01mol/L亚硫酸钠；0.01mol/L磷酸钠，pH7.0），在磁力搅拌器中缓缓匀浆30min。在8000r/min离心15min，收集上清液，并在100OOOr/min离心30min。沉淀物以每克叶片组织加入5mL缓冲液，并取出2.5mL在10%～40%的蔗糖梯度中分层（70OOOr/min下离心45min-BECkman.SW28离心机），乳白色带中即为病毒粒子。收集病毒粒子，并以1∶1比例再溶于缓冲液中，在100OOOr/min离心1h。含有病毒粒子的沉淀物溶于无菌重蒸水中，浓度调至10mg/mL。产物立即使用或在-80℃下保存。详细参见Van.den.Hurk，J.，Tas，P.W便携式防水溶解氧测定仪.L.and.Peters，D.J.Gen.Virol.1977，36：81。